細(xì)胞凍存的程序降溫盒的使用注意事項
關(guān)鍵詞： 細(xì)胞 凍存 程序 降溫盒 
細(xì)胞凍存有兩種方法：傳統(tǒng)的方法是利用冷存管處于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降溫方法是利用程序降溫盒設(shè)定程序由室溫降低至-80℃，最后再放置到液氮槽中長期保存。
經(jīng)驗1：凍存盒外表面有刻度的吧，異丙醇液面要高于最底線。凍存盒肯定是先放在室溫，然后放進去細(xì)胞，置于-80，利用異丙醇實現(xiàn)梯度降溫啊。 根據(jù)論壇里的討論，異丙醇使用過一段時間后是要更換的，但是我一直沒換過，也沒發(fā)現(xiàn)很大問題。 
經(jīng)驗2：我們實驗室凍存盒平時放4度，需要凍細(xì)胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮，貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?，F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的，很方便，效果也不錯的。 
經(jīng)驗3：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮，效果很不錯。異丙醇熔點：-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹杂卸疽后w。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激數(shù)據(jù)：眼睛- 兔子100 毫克/ !請注意清理! 
經(jīng)驗4：應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的，因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右，所以從-80℃拿出來的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次，而且保證液體量達到刻度線，否則降溫效果會受到影響。 
經(jīng)驗5：凍存盒里的異丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理論上是5次以后更換異丙醇，但是異丙醇對環(huán)境有害，我們可以多用幾次，只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO 對細(xì)胞有毒性，尤其是室溫的時候，所以凍存盒和凍存液先放4°，等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里，還放回4°，等到出細(xì)胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉(zhuǎn)入液氮。  程序降溫盒這個梯度降溫可大大提高細(xì)胞凍存的存活率，由于程序降溫盒內(nèi)存在100%濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯，因此程序降溫盒也可以用于細(xì)胞復(fù)蘇。